糖化血紅蛋白系列微課程10：離子交換HPLC方法的讀圖技巧

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各位朋友：

大家好，我是來自同濟大學附屬東方醫院臨床檢驗科的丁夢蕾醫生，今天我們來學習一下離子交換高效液相色譜法檢測糖化圖譜的相關知識。

圖譜通常不會反映在檢驗報告中，那為什麼我們還需要學會檢視圖譜呢？其實圖譜中包含了很多資訊，綜合評估這些資訊是我們檢驗科醫生解釋結果和核發報告的重要依據。

離子交換高效液相色譜法是臨床目前檢測糖化最常用的檢測方法，相較於其他方法，這種方法準確度高，重複性好，抗干擾能力強，但常常受到異常血紅蛋白的影響。

我們先來看一下一張糖化圖譜的主要組成：如圖所示圖譜主要包括三部分，第一部分是儀器和樣本的基本資訊，包括儀器型號、檢測日期和時間、樣本號和定標曲線方程。左邊的圖譜額外顯示了柱溫箱的溫度和管路壓力，可以幫助我們實時監測儀器的狀態。第二部分就是最主要的色譜圖。色譜圖橫座標代表出峰時間，縱座標為百分比，根據血紅蛋白中的各個組分的出峰時間及含量繪製出色譜圖，並將具體數值及比例顯示在第三部分，最後給出糖化的具體結果。在右圖的結果中一般會有六個峰，按照出峰時間依次是A1a A1b F LA1c SA1c 和A0峰。A0峰面積最大且是最後一個峰，代表未糖化的血紅蛋白；在他之前的這個峰SA1c就是我們要測的糖化血紅蛋白A1c，計算他的峰面積所佔的比例就可以得到HbA1c的結果。在之前的LA1C主要指不穩定的糖化血紅蛋白，F峰代表血紅蛋白F，透過前面的學習我們知道，血紅蛋白F在嬰兒體內較高，在成年人體內只佔血紅蛋白總量的0。5%，成年人中HbF升高往往是β型地中海貧血的主要診斷指標。F峰的前面是A1a和A1b，左圖與右圖相比，不能完全區別A1a和A1b，兩個峰往往融合在一起，但並不影響糖化的檢測結果。A1a A1b與A1c加在一起就是總的糖化血紅蛋白A1。而最前端的未知峰，往往不具備臨床意義。

瞭解了圖譜的基本資訊後，我們在日常工作中，可以透過圖譜保證資料的準確性。對於異常的圖譜，我們要及時發現並分析原因，作相應的處理。那麼哪些是異常的圖譜呢？我們在臨床工作中較常遇到的主要是：

第一種峰面積過高或過低（機器會出現AREA HIGH或是 AREA LOW的報警）；

過高往往是樣本未完全混勻或者是久置後發生了自然沉降，可將樣本混勻後重新檢測；或使用配套的溶血劑按比例稀釋樣本後重新檢測；

峰面積過低可能是由於樣本不足或是患者本身貧血，機器無法計算糖化的結果或是直接報零。採用手工稀釋後再次上樣，可以解決大多數的問題。這裡要注意的是，有時峰面積數值往往是正常的，但是圖譜看上去是與峰面積過低類似的異常圖譜，這是要注意排查管路是否發現洩漏。

第二種是異常峰的出現，在血紅蛋白C 、E、F或是S型的血紅蛋白病患者的圖譜中常出現異常峰，這時我們需要用可以檢測變異血紅蛋白的機器進一步檢測，並結合多種檢測技術綜合分析。如圖，sA1c前面由四個峰變為兩個峰，使用能檢測變異蛋白的糖化儀複測發現SA1c與A0峰中間出現了異常峰，再透過毛細管電泳檢測可以看到異常血紅蛋白的出現；這一張是F峰的異常增高，與前一張不同的是F峰的峰面積遠高於A1c峰，透過變異檢測和電泳檢測都可以看到血紅蛋白F的異常增多。若異常峰頻繁出現在A0峰前後，我們還需考慮是否是由於層析柱的老化導致峰的出現，可以透過更換層析柱來排除問題。

以上就是本節課的主要內容，仔細檢視圖譜能夠幫助我們更全面瞭解被測者體內血紅蛋白的組成，更好地服務臨床與患者，謝謝大家

今天的分享就到這裡，我們下次再見！

（圖片源於網路）

供稿：

上海市醫學會糖尿病分會監測與治療學技術學組

上海市醫學會檢驗分會生化學組

作者：丁夢蕾 同濟大學附屬東方醫院臨床檢驗科

稽核：

李小英 上海市醫學會糖尿病分會主任委員

關 明 上海市醫學會檢驗分會主任委員

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