支原體清除服務

很多科研小夥伴在細胞培養的過程中，總是出現各種各樣的情況和問題，比如，

細胞漏液、不貼壁、細胞有黑點、支原體汙染、不增殖、細胞老化變形、復甦存活率低

等等，這些問題對於參與細胞實驗的小夥伴來說，是急需解決的大問題，好不容易買來的細胞，剛剛進行培養傳代，就出現了以上的各種問題，這樣的情況通常都會令小夥伴們無比抓狂。

因為想要開展後續實驗，培養細胞往往是第一要事，細胞養不好，後續實驗就無法進行。

如果排除了其他

試劑選擇不當、細胞株老化、復甦存活率低

等原因，而仍有上述一種或幾種情況，那麼還有一種情況發生，那就是你的細胞可能被汙染了。所以不管發生哪種型別的汙染情況都會造成相同的結果，就是實驗需要重新做，這樣不僅增加了實驗成本，而且又浪費工作時間，還增加了實驗的重複性。

而且以汙染細胞和未汙染細胞為基礎進行實驗時，有可能得到的實驗結果完全不同。更為嚴重的是，如果你所研究的細胞是另外一種細胞的話，那所做的所有工作可能會一文不值。

那麼為什麼一定要進行支原體汙染清除呢？

支原體汙染清除要求

從2013年開始，《Nature》期刊已正式要求投稿的文章，如涉及細胞培養都要進行支原體檢測。以細胞為載體的科學研究，如果不能保證所用的細胞無支原體汙染，則實驗結果很可能是極端不可靠甚至是完全錯誤的！

支原體直徑約為0。1-0。3 μm，具有變形能力，可透過常見過濾膜（0。22-0。45 μm），因此常規的無菌過濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對支原體無效。支原體汙染是細胞培養領域的一個世界性問題，世界各國細胞系支原體汙染的平均比例為30-60%。

支原體可透過細胞之間交叉汙染，操作人員的口腔、面板造成汙染，或者血清等新增物而帶入汙染。

電鏡下的支原體

支原體在光學顯微鏡下不可見，一般不會引起培養物混濁，因此細胞被支原體汙染一般難以察覺。支原體會消耗必須氨基酸，影響

細胞生長速率

，促進代謝物積累，

改變細胞形態

，

影響 DNA、RNA 以及蛋白質的合成

，

抑制細胞因子表達

，

改變被汙染細胞的基因表達譜

，

誘導染色體畸變

。

支原體清除服務包括以下幾個方面：

服務物件

1。 實驗室的種子細胞，如從ATCC、JCRB、DMSZ等國外權威細胞庫採購的珍貴細胞系；

2。 組織珍貴的原代細胞；

3。 需要進行基因編輯的細胞；

4。 各類幹細胞（含iPS細胞）；

5。 稀有細胞。

服務內容

1。根據客戶提供的細胞名稱、細胞代次、細胞型別制定細胞的支原體清除方案；

2。 細胞STR鑑定（選做）；

3。 支原體PCR法檢測支原體汙染程度；

4。 細胞的支原體清除，一般汙染單一支原體的清除時間為2周左右，感染多種支原體且非常嚴重的細胞，清除時間需要延長，約3-4左右；

5。 2-3周後，再次進行支原體檢測，如果細胞支原體清除乾淨，將換為支原體預防培養方案，繼續維持一週左右時間。如未清除乾淨，則適當延長1-2周繼續清除頑固支原體，2周後再次進行復檢。

服務週期與價格

送樣要求

1. 復甦細胞（充液運輸）

：

生長狀態良好的細胞，待達70%-80%匯合時，去掉舊培養液換入新培養液，量要達到培養瓶的頸部（過滿易汙染），保留少許空間，旋緊瓶蓋，避免空氣過多運輸中氣泡運動易使細胞脫落。

2. 凍存細胞（乾冰運輸）：

將乾冰提前置於塑膠泡沫盒中，以最快的速度將細胞凍存管從液氮轉入乾冰中，用膠帶封好泡沫盒，最好在外面加套一層紙盒，延緩乾冰揮發。

注：根據距離選擇泡沫盒，泡沫盒壁的厚度不小於 50mm，內部空間不小於200× 200× 200mm，放入足量乾冰。

支原體清除案例

如上圖1所示，左側為支原體汙染的MCF-7細胞，右側為支原體清除後的MCF-7細胞，倒置顯微鏡下可明顯看出細胞間隙間黑點明顯減少，細胞邊緣清晰，狀態良好。

如上圖2所示，左側為支原體汙染的Hep G2細胞，右側為支原體清除試劑處理的Hep G2細胞。左側有支原體汙染的細胞樣品可以觀察到細胞核周圍微粒狀或絲狀藍色熒光。支原體汙染嚴重的細胞可以觀察到大量微粒狀或絲狀藍色熒光。右側細胞支原體汙染被清除乾淨，僅觀察到細胞核的藍色熒光，證明支原體已被清除乾淨。

注意事項

1。 由於各個實驗室細胞培養體系不同，且更換體系細胞會需要一段時間的適應，故本服務需客戶自行提供足量的培養體系；

2。 根據客戶需求，STR鑑定服務為選做專案，賽百慷生物承諾對於支原體清除服務細胞進行單獨隔離培養，客戶為保證實驗嚴謹性，可選擇我司進行STR鑑定服務；

3。 由於細胞隨時可能會存在交叉的風險，只認可我司接收細胞後第一時間進行的STR鑑定結果；

提供結果

原始支原體PCR結果圖片和無支原體汙染的細胞（根據客戶需要選擇充復甦/凍存發貨形式）。

保密承諾

我公司鄭重承諾：客戶提供產品的檢測資訊與資料，履行保密義務，未經客戶許可，不得擅自公開發表或使用，不得洩露給第三方。

支原體清除試劑

另外，賽百慷還提供可有效抑制並清除多種支原體的支原體清除劑，包括 Mycoplasma orale， M。 arginini， M。 hyorhinis和Acholeplasma laidlawii。經過大量實驗驗證對細胞幾乎沒有毒性，對細胞的各種檢測沒有干擾。通常在細胞培養液中加入本試劑約1至2周即可有效抑制和清除支原體。

iCell支原體清除劑為透明淡黃色液體。具體的工作濃度因支原體的種類不同而有所不同，在實際防止支原體汙染或清除支原體汙染時需摸索適當的工作濃度。

支原體清除試劑經過了上百種細胞的測試和長期的實驗驗證，對細胞無害，對清除支原體汙染效果顯著，能夠很好的抑制和殺滅支原體。

所以，科研小夥伴們如果你們手裡珍貴的細胞被支原體汙染了，沒有辦法做實驗，沒有其他地方採購，千萬不要扔掉，交給我們，相信我們，我們會還你一個狀態好又無汙染的好細胞，而且我們保證，不成功不收費的哦~~~