谷氨醯胺(Glutamine, Gln)含量測定試劑盒說明書

胃蛋白酶（Pepsin）試劑盒說明書

（酶標法）

測定意義：

胃蛋白酶是一種消化性蛋白酶，由胃粘膜主細胞分泌，可將食物中蛋白質分解成小肽段。一般用於神經性低酸症的鑑別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等症狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。

測定原理：

胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，其產物進一步與福林試劑反應後顯藍色；一定範圍內，其顏色的深淺與胃蛋白酶活力呈正比。

需

自備

的儀器和

用品

：

酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、酶標板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成

和配製

：

試劑一：液體，50mL×1瓶，4℃儲存；

試劑二：液體，15mL×1瓶，4℃儲存；

試劑三：粉劑，2支，臨用前取1支試劑三，加6。25ml試劑二充分溶解，4℃避光儲存，可用2天。

試劑四：固體，1支，加雙蒸水10ml充分溶解，4℃儲存；

試劑五：固體，1支，加雙蒸水15ml充分溶解，4℃儲存；

試劑六：液體，2。5ml×1瓶，4℃儲存；

標準品：液體，1ml×1支，濃度為0。8mmol/L，4℃儲存。

粗酶液提取

：

稱取約0。05g組織或者50μl胃液，加入0。5mL試劑一進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

粗酶液和試劑三置於37℃預熱

充分混勻，8000rpm，離心10min，取上清60μl，按下表將試劑依次加入酶標板中

充分混勻，室溫靜置20min，在酶標儀上測定580nm處吸光值。

提醒：

標準空白管和標準管都只需做一管，而空白管和測定管每個樣品都做，所以規格為50管/24樣，即每個試劑盒實際只能測定24個樣品。

粗酶液蛋白質濃度需要另外測定。

胃蛋白酶活性

計算：

單位的定義：37℃下，每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成1μmol酪氨酸的酶量為一個胃蛋白酶活力單位。

胃蛋白酶（U/mg prot）=80× （△OD

測定

-△OD

空白

） /（OD

標準管

-OD

標準空白管

）÷蛋白濃度（mg/mL）

注意事項：

試劑三需避光儲存，臨用前配製，未用完的試劑，4℃儲存，可使用2天。

加入試劑四後，需振搖1min左右，使之充分反應。

實驗前用1～2個樣做預實驗，如吸光值過高，需用試劑一稀釋後再進行測定。

如測定細胞中胃蛋白酶活性，取400~500萬細胞，除去培養基，消化後，離心棄去其他試劑，然後加試劑一，超聲破碎，然後10000g 4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

lmbio.com.cn

QQ:1019057849

微信：Kimmy520xy

電話：13585802892

谷氨醯胺(Glutamine, Gln)含量測定試劑盒說明書

谷氨醯胺

(Glutamine

,

G

ln

)

含量測定試劑盒說明書

正式測定前務必取

2-3個預期差異較大的樣本做預測定

谷氨醯胺（

G

lutamine

）是

構成人體蛋白質所必需的

20

種氨基酸之一。是人體內最普遍的、不可缺乏的條件性必需氨基酸，是構成蛋白質不可缺少的氨基酸之一，更是某些細胞培養中最基本的元素。由於

谷氨醯胺不穩定的特性，在細胞培養基的整合中，易自發性分解為

穀氨酸

和氨離子，而氨離子對細胞的毒性很強，因此，在細胞培養體系中，須密切關注

谷氨醯胺的

儲存壽命（

SHELF LIFE

）和實時監測。

在

谷氨醯胺

酶（

Glutaminase

）

作用下

，

谷氨醯胺發生

脫氨基

反應，產生

穀氨酸

（

glutamic acid

）和氨離子

；

谷氨醯胺

+H

2

O

———————穀氨酸

+NH

4

+

然後用顯色劑進行顯色，顯色後在

570

nm

下進行測定

。

分光光度法

50

管/

可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、

1 mL

玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

48

樣

試劑一

：液體

5

0mL×

2

瓶，

4

℃

儲存；

試劑

二

：液體

1。5ml

×

1

瓶，

-20

℃

儲存；

試劑三，粉劑

×

1

瓶，

4

℃

儲存；

臨用前加入

10mL

蒸餾水，充分混勻溶解，用不完的試劑仍

4

℃

儲存

測定意義：

測定原理：

需

1

、

細菌或培養細胞

樣品

：先收集細菌或細胞到離心管內，離心後棄上清；按照

細菌或細胞數量（

10

4

個）：試劑一體積（

mL

）為

500~1000

：

1

的比例（建議

10

00

萬細菌或細胞加入

2

mL

試劑一）

，超聲波破碎細菌或細胞（

冰浴，

功率

20

％

或

200W

，超聲

3s

，間隔

10s

，重複

30

次）；

8000g

常溫

離心

10min

，取上清，置冰上待測。

2

、

組織

樣品

：

按照組織質量（

g

）

：試劑一體積

（mL）

為

1

：

5~10

的比例（建議

稱取約

0。

2

g

組織，加入

2

mL

試劑一），

進行冰浴勻漿。

8000g

常溫

離心

10min

，取上清，置冰上待測。

3

、血清（漿）

或細胞培養液

樣品：

按照血清（漿）或細胞培養液體積（

mL

）

：試劑一體積

（mL）

為

1

：

5~10

的比例（建議

取

0。2mL

血清（漿）

或者細胞培養液

加入

2

mL

試劑一）

，

進行冰浴勻漿。

8000g

常溫

離心

10min

，取上清，置冰上待

自備

1、

分光光度計預熱

30min

以上，調節波長至

570nm

，蒸餾水調零。

2、

在有蓋

EP

管中加入下列試劑

：

混勻，

37

℃水浴

3

0min

（蓋緊，以防止水分散失），

90

℃水浴

20min

（蓋緊，以防止水分散失），流水冷卻，於

570nm

波長處比色，

△A=A測定管

-

A對照管

1

- A對照管

2

。

對照管

2只要做一管。

的儀器和用品：

試劑的組成和配製：

標準條件下測定迴歸方程為

y = 0。0

074

x

-

0。5255

；

x

為

谷氨醯胺

含量（

g/mL

），

y

為

吸光

值。

谷氨醯胺

提取：

按照血清（漿）

或者細胞培養液

體積計算

谷氨醯胺

含量

（

μg/mL

）

=

［

（

△A

+0。5255

）÷0。0

074

×

V1］

÷

（V3

×

V1

÷V

2

）

=1351

×（

△A

+0。5255

）

測定步驟

按照蛋白濃度計算

谷氨醯胺

含量

（

g/

mg prot

）

=［

（

△A

+0。5255

）÷0。0

074

×

V1］

÷

（V1

×

Cpr）=135。1

×（

△A

+0。5255

） ÷

Cpr

谷氨醯胺

含量計算：

按照樣

本

質量計算

谷氨醯胺

含量

（

g/g

鮮重

）

=［

（

△A

+0。5255

）÷0。0

074

×

V1］

÷

（W

×

V1

÷V

2）=270。2

×（

△A

+0。5255

） ÷

W

5

、按照細菌或細胞密度計算

谷氨醯胺

含量

（

μg/10

4

cell

）=

［

（

△A

+0。5255

）÷0。0

074

×

V1］

÷

（1000

×

V1

÷V

2）=0。27

×（

△A

+0。5255

）

V1

：加入反應體系中樣本體積，

1mL

；

V

2

：加入提取液體積，

2

mL

；

V

3

：加入

血清（漿）或細胞培養液體積

，

0。

2

mL

；

Cpr

：樣本蛋白質濃度，

mg/mL

；

W

：樣

本

質量，

g

；

10

00

：細菌或細胞總數，

10

00

萬。

注意：

1、

該試劑盒僅適用於發酵液或組織中谷氨醯胺含量測定，檢測下限為

10

0g/mL

。

2

、標準曲線線性範圍為：

100

g/mL

-600

g/mL

。

3

、Δ

A

線性範圍為：

0。01-2

；

若大於

2

則需要將上清液用試劑一稀釋至適當倍數後測定，計算公式中乘以相應稀釋倍數。

1

、

2

、