高效液相色譜儀測定11種三嗪類農藥的含量

一、方法原理

以丙酮-二氯甲烷為提取劑，用索氏提取或加壓流體萃取法提取土壤或沉積物中的三嗪類農藥，提取液經固相萃取淨化、濃縮、定容後用高效液相色譜儀分離，紫外檢測器檢測，以保留時間定性，外標法定量。

二、試劑和材料

除非另有說明，分析時均使用符合國家標準的分析純試劑。實驗用水為新制備的超純水或蒸餾水。

2。1 丙酮（C 3 H 6 O）：農殘級。

2。2 二氯甲烷（CH 2 Cl 2 ）：農殘級。

2。3 正己烷（C 6 H 14 ）：農殘級。

2。4 乙腈（C 2 H 3 N）：液相色譜級。

2。5 丙酮-二氯甲烷混合溶劑：1+1。用丙酮和二氯甲烷按 1：1 體積比混合。

2。6 丙酮-正己烷混合溶劑：1+9。用丙酮和正己烷按 1：9 體積比混合。

2。7 三嗪類農藥標準貯備液：ρ=1 000 mg/L。

可直接購買市售有證標準溶液，按照標準溶液證書要求進行儲存，使用時應恢復至室溫並搖勻。

2。8 三嗪類農藥標準使用液：ρ=10。0~100 mg/L。

用乙腈稀釋標準貯備液，配製成濃度為 10。0~100 mg/L 的標準使用液，於4℃以下避光、冷藏，儲存時間為 60 d。

2。9 無水硫酸鈉（Na 2 SO 4 ）。

使用前置於馬弗爐中 450℃烘烤 4 h，冷卻後裝入磨口玻璃瓶中密封，於乾燥器中儲存。

2。10 矽藻土：粒徑 150~250 μm（100~60 目）。

使用前置於馬弗爐中 450℃烘烤 4 h，冷卻後裝入磨口玻璃瓶中密封，於乾燥器中儲存。

2。11 石英砂：粒徑 150~250 μm（100~60 目）。

使用前置於馬弗爐中 450℃烘烤 4 h，冷卻後裝入磨口玻璃瓶中密封，於乾燥器中儲存。

2。12 固相萃取柱。

市售矽酸鎂、矽膠、氨基或其他等效固相萃取柱，1 000 mg/6 ml 或更大容量規格。

2。13 玻璃棉或玻璃纖維濾膜。

使用前用丙酮-二氯甲烷混合溶劑浸洗，待溶劑揮發幹後，置於磨口玻璃瓶中密封儲存。

2。14 索氏提取套筒：玻璃纖維或天然纖維材質套筒。

玻璃纖維套筒使用前置於馬弗爐中450℃烘烤4 h，冷卻後置於磨口玻璃瓶中密封儲存；天然纖維材質套筒使用前用丙酮-二氯甲烷混合溶劑浸洗，待溶劑揮發幹後，置於磨口玻璃瓶中密封儲存。

2。15 氮氣：純度≥99。99%。

三、儀器和裝置

3。1 高效液相色譜儀：具有梯度洗脫功能，柱溫箱溫度可控，配備紫外檢測器或二極體陣列檢測器。

3。2 色譜柱：填料為十八烷基矽烷鍵合矽膠，粒徑 5 μm，柱長 250 mm，內徑 4。6 mm 的色譜柱或其他等效色譜柱。

3。3 提取裝置：索氏提取裝置或加壓流體萃取儀。

3。4 濃縮裝置：旋轉蒸發儀、氮吹儀或其他同等效能的濃縮裝置。

3。5 固相萃取裝置。

6。6 冷凍乾燥儀。

3。7 棕色玻璃瓶：250 ml。

3。8 一般實驗室常用儀器和裝置。

四、樣品

4。1 樣品採集和儲存

按照 HJ/T 166 的相關規定進行土壤樣品的採集和儲存；按照 GB 17378。3、GB 17378。5、HJ 494、HJ 495 和 HJ/T 91 的相關規定進行沉積物樣品的採集和儲存。

樣品應於潔淨的棕色玻璃瓶中儲存，運輸過程中應避光、密封、冷藏。如暫不能分析，土壤樣品應在 4℃以下冷藏、避光儲存，儲存時間為 5 d（其中西瑪津、西草淨、阿特拉津、仲丁通、撲滅津和去草淨儲存時間為 15 d）；沉積物樣品應冷凍、密封、避光儲存，儲存時間為 8 d。樣品提取液（7。4。1）在 4℃以下冷藏、密封、避光儲存，儲存時間為60 d。

4。2 樣品的製備

將樣品置於不鏽鋼盤或聚四氟乙烯盤中，除去枝棒、葉片、石子等異物，混勻，並按照HJ/T 166 的要求進行樣品縮分，可採用冷凍乾燥或乾燥劑兩種方式脫水。

冷凍乾燥法：取適量混勻後樣品，放入冷凍乾燥儀中乾燥脫水。乾燥後的樣品需研磨、混勻。稱取 10 g（精確到 0。01 g）樣品進行提取。

乾燥劑法：稱取 10 g（精確到 0。01 g）新鮮樣品，索氏提取法加入適量無水硫酸鈉、加壓流體萃取法加入適量矽藻土，研磨成流沙狀，全部轉移至提取裝置中，待提取。

4。3 水分的測定

在稱取提取樣品時，另稱取一份樣品進行水分的測定。土壤幹物質含量的測定按照 HJ613 的要求進行，沉積物含水率的測定按照 GB 17378。5 的要求進行。

4。4 試樣的製備

4。4。1 提取

以丙酮-二氯甲烷混合溶劑為提取劑，用索氏提取法或加壓流體萃取法提取。

索氏提取法：將全部樣品小心轉入索氏提取套筒內，將套筒置於索氏提取器迴流管中，在底瓶中加入 200 ml 丙酮-二氯甲烷混合溶劑迴流提取 24 h，迴流速度控制在 3~4 次/h，收集提取液。

加壓流體萃取法：按照 HJ 783 進行樣品裝填，靜態萃取 3 次後收集提取液。萃取參考條件：載氣壓力 0。8 MPa、加熱溫度 100℃、萃取壓力 1。034×10 7 Pa（1500 psi）、預加熱平衡 5 min、靜態萃取 5 min、溶劑淋洗 60%池體積、氮氣吹掃 60 s。

注：若經過驗證也可使用其他等效提取方法。

4。4。2 過濾和脫水

在玻璃漏斗內墊一層玻璃棉或玻璃纖維濾膜，加上適量無水硫酸鈉，將提取液過濾到濃縮容器中。再用 2~3 ml 丙酮-二氯甲烷混合溶劑洗滌提取容器並沖洗漏斗，一併收集到濃縮容器中。

4。4。3 濃縮

將提取液濃縮至約 0。5 ml，加入約 5 ml 正己烷並濃縮至約 1 ml，將溶劑完全轉換為正己烷，待淨化。

4。4。4 淨化

將固相萃取柱固定在固相萃取裝置上。依次用 5 ml 丙酮和 10 ml正己烷活化萃取柱，保持柱頭浸潤。在溶劑流乾之前，將濃縮後的約 1 ml 提取液轉入柱內，開始收集流出液，用 3 ml 正己烷分 3 次洗滌濃縮容器，洗液全部移入柱內，用 10 ml 丙酮-正己烷混合溶劑進行洗脫，收集全部洗脫液。

4。4。5 濃縮定容

將淨化後的洗脫液濃縮至約 0。5 ml，加入約 3 ml 乙腈，再濃縮至約 0。5 ml，將溶劑完全轉換為乙腈，並用乙腈定容至 1。0 ml 待測。

五、分析步驟

5。1 儀器參考條件

流動相：A 為水，B 為乙腈，梯度洗脫參考程式見表 1；

流速：1。0 ml/min；

柱溫：30℃；

進樣量：10 μl；

檢測波長：222 nm，輔助定性波長：231 nm。

5。2 標準曲線的建立

取一定量三嗪類農藥標準使用液，用乙腈稀釋，配製至少 5 個濃度點的標準系列，目標化合物質量濃度分別為 1。00 mg/L、10。0 mg/L、25。0 mg/L、50。0 mg/L、100 mg/L，貯存於棕色進樣瓶中，待測。按照儀器參考條件，從低濃度到高濃度依次進樣分析，以標準系列溶液中目標化合物濃度為橫座標，以其對應峰面積（峰高）為縱座標，建立標準曲線。

5。3 標準樣品色譜圖

圖 1 為 11 種三嗪類農藥參考色譜圖。

1—西瑪津；2—莠去通；3—西草淨；4—阿特拉津；5—仲丁通；6—撲滅通；

7—莠滅淨；8—撲滅津；9—特丁津；10—撲草淨；11—去草淨

圖 1 11 種三嗪類農藥標準樣品參考色譜圖（ρ=5。00 mg/L）

5。4 試樣測定

按照與標準曲線相同儀器條件進行試樣的測定。若試樣中目標化合物濃度超出標準曲線範圍，樣品需要重新提取，分取適量提取液後按步驟 7。4。2~7。4。5 重新處理後測定。

六、結果計算與表示

6。1 定性分析

以目標化合物的保留時間定性，必要時可採用標準樣品加入法、不同波長下的吸收比、紫外光譜圖掃描等方法輔助定性。

6。2 結果計算

土壤樣品中三嗪類農藥的質量濃度按式（1）計算：

式中：w i ——樣品中目標化合物 i 的質量濃度，mg/kg；

ρ i ——由標準曲線所得試樣中目標化合物 i 的質量濃度，mg/L；

V i ——試樣定容體積，ml；

m i ——樣品量，g；

w dm ——樣品的幹物質含量，%；

V 0 ——總提取液體積，ml；

V——分析時所用提取液體積，ml。

沉積物樣品中三嗪類農藥的質量濃度按式（2）計算：

式中：w j ——樣品中目標化合物 j 的質量濃度，mg/kg；

ρ j ——由標準曲線所得試樣中目標化合物 j 的質量濃度，mg/L；

V j ——試樣定容體積，ml；

m j ——樣品量，g；

w H 2 O ——樣品的含水率，%；

V 0 ——總提取液體積，ml；

V——分析時所用提取液體積，ml。

6。3 結果表示

測定結果小數點後位數的保留與方法檢出限一致，最多保留 3 位有效數字