您現在的位置是：首頁 > 藝術

忽視了色譜系統適用性對分析方法的影響，慘

由小析姐發表于藝術2021-12-29

適用性系統色譜谷胱甘肽試驗

簡介USP 通則621 色譜法規定的系統適用性試驗要求也包括理論板數、分離度、拖尾因子、重複性和靈敏度，但除100%含量測定重複性外，其他系統適用性引數均未給出明確規定

拖尾因子和不對稱因子是一個嗎

系統適用性必須基於儀器、電子元件、分析方法操作以及被測物是一個整體的系統。系統適用性試驗的引數由所評價的分析方法決定。對於色譜法，系統適用性尤其重要，向USP 提交的檔案應該註明符合色譜法621 中常規測試章節中的有關係統適用性的要求。

色譜方法一般包括

紙色譜、薄層色譜、氣相色譜、液相色譜、離子色譜、分子排阻色譜、毛細管電泳

等。色譜系統適用性試驗在色譜分析方法中扮演非常重要的角色，尤其是對試驗條件（流動相、不同品牌或不同批號色譜柱、不同品牌儀器）較為敏感的分析方法。

1 系統適用性試驗的定義

液相色譜典型的變動因素有

被測溶液的穩定性、不同儀器、不同分析人員、流動相的pH 值和組成、不同廠牌或批號的色譜柱、柱溫和流速

。

氣相色譜法典型的變動因素有

不同批號或供應商的色譜柱以及溫度、流速等。

系統適用性必須基於儀器、電子元件、分析方法操作以及被測物是一個整體的系統。系統適用性試驗的引數由所評價的分析方法決定。

對於色譜法，系統適用性尤其重要，向USP 提交的檔案應該註明符合色譜法621 中常規測試章節中的有關係統適用性的要求。

《中華人民共和國藥典》2015 年版通則9101“藥品質量標準分析方法驗證指導原則”未對系統適用性試驗進行單獨論述，僅在耐用性項下提到：經試驗，測定條件小的變動應能滿足系統適用性試驗要求。

2 系統適用性的要求

《中華人民共和國藥典》色譜法項下系統適用性試驗要求更加明確，但目前各論中收載的品種項下的系統適用性要求卻是最低的。

《中華人民共和國藥典》通則0502 薄層色譜法提到了系統適用性要求：

通則0512 高效液相法提到的系統適用性要求：

離子色譜法、分子排阻色譜法（分離度一般應大於2。 0）、氣相色譜法、超臨界流體色譜法、臨界點色譜法等的系統適用性要求，除另有規定外，應照高效液相色譜法項下的規定。

USP 通則621

色譜法規定的系統適用性試驗要求也包括理論板數、分離度、拖尾因子、重複性和靈敏度，但除100%含量測定重複性外，其他系統適用性引數均未給出明確規定。

BP2018 附錄Ⅲ( Appendix Ⅲ) 色譜分離技術

中對系統適用性要求也包括理論板數、分離度、拖尾因子、重複性和靈敏度。

也僅對對稱因子規定為0。8 ～ 1。5 之間，100% 含量測定重複性要求與USP41 規定一致，未對其他系統適用性引數作明確規定。

重新審視一下系統適用性試驗的各引數，它們之間並非孤立的，而是相互影響、相互作用、相互關聯。分離度Ｒs 是柱效N 的函式；拖尾因子與重複性直接相關，並在一定程度上影響分離度；靈敏度是保證上述所有引數有意義的基礎。

因此，系統適用性試驗要求，應該是一個整體的評價，而不是單獨對某一個引數的要求。即便是拖尾因子，《中華人民共和國藥典》2015 年版指出，除另有規定外，應在0。 95 ～ 1。 05 之間； BP 2018 規定應在0．8 ～ 1．5 之間。

但在實際運用過程中，並非所有系統適用性試驗要求中拖尾因子都在上述範圍內。在某些特殊情況下，是可以突破上述系統適用性的一般要求的。

如USP 41 收載的二甲雙胍片溶出度檢測方法3 中，系統適用性試驗要求為: 拖尾因子NMT 2．0，柱效NLT 1 500。實驗室工作曾經進行鹽酸二甲雙胍的溶出度研究工作。二甲雙胍在較大濃度檢測時，容易出現拖尾因子較大的情況。

所以，系統適用性試驗作為分析方法不可或缺的一部分，應該是結合分析方法本身一起來考慮。系統適用性要求應該是以滿足分析方法檢測為目的。

3 系統適用性試驗的必要性

USP 40 收載的谷胱甘肽有關物質方法如下：

系統適用性溶液：取谷胱甘肽對照品、抗壞血酸對照品和D-苯甘氨酸對照品各適量，加水溶解並稀釋製成每1 mL 中約含谷胱甘肽0。 5 mg、抗壞血酸0。 5 mg 和D-苯甘氨酸0．1 mg 的混合溶液作為系統適用性試驗溶液。

系統適用性要求：抗壞血酸與谷胱甘肽峰之間的分離度、谷胱甘肽與L-苯甘氨酸之間的分離度均不小於5，重複性不大於1。 5%。

根據谷胱甘肽的分子結構，谷胱甘肽屬於在C18柱保留較弱的化合物，所以出峰時間較早，USP40 方法流動相中採用了離子對試劑來增加保留，改善分離。

然而，其保留時間也僅約為5 min（色譜柱規格：15 cm × 4．6 mm，5 μm，L1）。某廠家谷胱甘肽註冊標準中，其他色譜條件與USP40 基本一致，規定調節流速使谷胱甘肽保留時間約為2 min。

分析出現上述差異的原因，主要有以下幾個方面:

① 離子對試劑的質量差異。

② 流動相比例差異較大，由於操作而引入的系統誤差。

③ 不同批號、型號色譜柱對谷胱甘肽色譜保留行為的差異。

④ 不同品牌儀器裝置等造成的差異等。

透過對谷胱甘肽分析方法的分析以及實際的操作可知，此分析方法是屬於對試驗條件較為敏感的方法。對於此類方法，可以對敏感的試驗條件給予更加具體的規定。但對離子對試劑的來源、因流動相比例差異大引入的系統誤差、不同品牌儀器等難以具體要求，即便色譜柱可以規定品牌和型號，但也會給後續的方法轉移和樣品檢測帶來了諸多不便。

因此，谷胱甘肽有關物質方法也未對上述條件乃至色譜柱加以規定。基於上述諸多問題，谷胱甘肽有關物質方法開發者們最終採用規定系統適用性試驗引數的辦法來解決方法重複性的問題，最終方法的準確性和精密度得到驗證，方法得以被USP 收載。

本文從USP41 按順序查找了abacavir sulfate，abiraterone acetate，acebutolol hydrochloride，acepromazine maleate，acetaminophen，acetazolamide 和acetylcysteine的含量測定方法，上述含量測定方法均規定了系統適用性試驗要求，具體見表1。