細胞清除可緩解咪喹莫特誘導的小鼠銀屑病樣皮炎（二）

2 結果

2。1 清除Vγ4 細胞後的小鼠咪喹莫特誘導的銀屑病樣皮炎表型減輕 研究發現小鼠背部脫毛區域連續 6 d 給予5%咪喹莫特乳膏後可模擬人的銀屑病皮損表現［16］。圖1a 為2 組小鼠正常面板及誘導炎症後的表型圖，從肉眼我們可以觀察到在咪喹莫特誘導的銀屑病樣皮損中，野生型組小鼠（WT Imq）的皮炎明顯重於Vγ4 清除型組（Vγ4 Imq）。依據PASI 評分標準繪製趨勢曲線圖，我們可以得出給藥2 d 後2 組小鼠均開始出現紅斑、鱗屑，給藥第3 天后開始出現斑塊，隨著給藥次數的增加，紅斑、鱗屑、斑塊的程度逐漸加重。將2 組小鼠紅斑、鱗屑、斑塊三者的得分累積後，比較2 組小鼠皮炎的總體差異。從圖1b 我們可以得出如下結論：清除Vγ4 細胞後的小鼠所誘導的銀屑病樣的紅斑、鱗屑、斑塊的厚度均減少。綜合上述結果，我們可以得出清除Vγ4 細胞後的小鼠咪喹莫特誘導的銀屑病樣皮損減輕這一結論。

a） The normal mouse back skin and phenotypical presentation of psoriasis-like skin inflammation induced by IMQ for 6 days； b） the score of erythema， scaling， and thickness according to PASI。 Symbols indicate mean score of eight mice per group。 *P<0。05。

圖1 咪喹莫特誘導的銀屑病樣皮炎及PASI 積分變化曲線

Fig 1IMQ-induced psoriasis-like skin inflammation and PASI score curve graph

2。2 清除Vγ4 細胞後的小鼠咪喹莫特誘導銀屑病樣小鼠的正常面板無明顯差異，誘導銀屑病樣皮炎後，皮炎的表皮組織變薄 正常及皮炎小鼠的面板組織野生型組和清除型組的小鼠表皮均增厚，真皮亦均經HE 染色後如圖2a，經ImageJ 軟體測量2 組小鼠正見炎性細胞浸潤（圖 2a，2b），但野生型組的小鼠表常及炎症表皮的厚度的結果如圖2b。從2 組小鼠的皮增厚更明顯，角化不全、真皮炎性細胞浸潤程度HE 染色及表皮厚度的差異可以得出如下結論：2 組更嚴重。

a） HE staining （× 100） of the normal back skin and psoriasis-like skin inflammation on day 6； b） the epidermis thickness at normal skin and inflammation。 The values were represented as mean±SD （n=4），*P<0。05。

圖2 正常面板及咪喹誘導銀屑病樣皮炎的組織病理學HE 染色（×100）和表皮組織厚度

Fig 2HE staining（×100） of the normal and dermatitis back skin sections and the epidermis thickness

2。3 咪喹莫特誘導的銀屑病樣中野生型小鼠真皮Vγ4T 細胞增多 正常及炎症真皮組織經消化、染色後的流式細胞儀檢測結果如下：野生型組小鼠正常、誘導皮炎後的真皮細胞均能檢測到Vγ4T 細胞，且誘導銀屑病樣皮炎後真皮內的Vγ4T 細胞比例明顯增加；清除Vγ4T 細胞的小鼠正常及誘導皮炎後的真皮內細胞幾乎均未檢測到Vγ4T 細胞，這表明200 μg Vγ4清除抗體可以清除掉小鼠真皮內的Vγ4T 細胞，該方法可以成功構建Vγ4 清除型小鼠模型（圖3）。

n=3。 a） Vγ4+γδ+T cells from digested dermal cells of WT-type and Vγ4-depleted mice； b） the percentage of Vγ4+γδ+T cells in WT-type and Vγ4-depleted mice。 The values were presented as mean±SEM。***P<0。001。

圖3 流式細胞儀分析Vγ4+γδ+T 細胞的表達

Fig 3The expression of Vγ4+γδ+T cells detected by FACS

2。4 清除型小鼠的銀屑病樣皮炎真皮組織IL-17、IL-23、IL-1β蛋白表達水平降低 研究表明在銀屑病樣皮炎模型中真皮γδT 細胞是IL-17 的主要來源，並且其分泌的IL-17 依賴於IL-23/IL-1β的刺激［15］。為了進一步驗證真皮Vγ4T 細胞是否是分泌IL-17 的主要γδT 細胞亞群，分別提取了誘導皮炎前以及誘導皮炎後的 2 組小鼠真皮組織蛋白，透過 Westernblot 檢測IL-17 以及IL-23、IL-1β的蛋白表達水平發現，Vγ4 清除型組IL-17 的蛋白表達水平較野生型組明顯降低，並且IL-23、IL-1β的蛋白表達水平也低於野生型組（圖4a），上訴的差異經統計學分析有意義（圖4b）。綜上所述，清除Vγ4T 細胞後真皮組織IL-17、IL-23、IL-1β蛋白表達水平均降低。

n=3。 a） Protein level was determined by Western blot； b） relative densities of protein level in each group。 The values were presented as mean±SD。 *P<0。05， ***P<0。001。

圖 4 Western blot 檢測真皮組織蛋白IL-17、IL-23、IL-1β的表達 Fig 4 The protein levels of IL-17， IL-23， and IL-1β in wild-type and Vγ4 T cells elimination mice detected by Western blotting。

未完待續~~~

文章出處：

免疫學雜誌2017 年2 月第2 期 IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol。 33 No。 2 Feb。 2017

諸 蓉，蔡小薇，李漪倩，黃 珂，冉 磊，賀偉峰，何 威，王儒鵬